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薄層色譜的使用和注意事項

瀏覽次數:6321發布日期:2021-08-05

                                                               薄層色譜的使用和注意事項
                                                               圣賓儀器科技上海有限公司          

1、 怎樣提高點樣效率?

點樣是造成TLC定量誤差的主要來源。實驗證明:定量毛細管更適合較小體積的點樣;微量注射器更適合較大體積的點樣。這主要是因為微量注射器受小氣泡、溶液回爬現象的影響較大。為避免不同定量毛細管間的點樣誤差、建議一塊薄層板上最好用同一只定量毛細管。但應注意更換樣品時,應將毛細管用超聲波或不同極性溶劑清洗干凈。在制備樣品時,溶樣溶劑黏度不能過高,以便于點樣;溶劑沸點過低則進樣體積易變,過高則會改變展開劑組成;對樣品溶解度過高會使樣點發生空心現象;常用的溶劑為甲醇、乙醇、丙酮。經典TLC樣點原點一般為直徑3mm點間距1--2cm 底邊距1.5cm;HPLC樣點原點一般為直徑1mm點間距5mm 底邊距1cm。

2、展開劑的選擇

TLC與HPLC相比,一個突出的優點就是流動相的選擇具有更大的靈活性。流動相的選擇的目的是使絕大部分樣品的RF值位于0.1--0.7之間并達到較好的分離,與此對應的是流動相要有適當的強度和組成。流動相強度越大,溶質RF值越大,但很可能降低分離能力;另外單一溶劑很難分離較復雜的混合物,根據相似相溶原理,要使用多元溶劑體系。一般展開劑體系選擇如下:根據分離樣品性質、薄層色譜板性質選擇一個二元溶劑體系,通過調節溶劑比例以尋求適合RF值,適合的RF值找到后,再尋求極性參數相同的二元溶劑體系兩個,以這三個組成為三點組成一個三角形,則可看到:三角形頂點是二元體系,邊是三元體系,三角形內是四元體系,并且極性一致,可根據幾何原理得出任一點組成。這種方法較為直觀,也較簡單。

3、TLC的通用顯色方法

理想的顯色希望靈敏度高、斑點顏色穩定、斑點與背景間的對比度好、斑點的大小及顏色的深度與物質的量成正比。在樣品組成并不*已知的情況下,通用顯色方法顯得成尤為重要。通用顯色法主要有:

(1)、紫外照射法:方便,不破壞樣品;

(2)、碘蒸氣法:通用性強,與紫外法結合靈敏度高于該兩法單獨使用;

(3)、熒光試劑:制造熒光背景,使原來紫外下無熒光物質被鑒別,有熒光物質更明顯;

(4)、硫酸溶液:對絕大多數有機物有效,但有破壞性。

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